ELISA: razlika med redakcijama

dodanih 27 zlogov ,  pred 14 leti
m
brez povzetka urejanja
m
[[Image:Microtiter plate.JPG|thumb|300px|[[Mikrotitrska plošča]] na kateri se izvaja ELISA.]]
 
'''Encimskoimunski test''', '''encimski imunski test''' ali '''ELISA''' ([[angleščina|angleško]]: ''Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay'') je [[biokemija|biokemijska]] metoda, ki se uporablja v [[imunologija|imunologiji]] za detekcijo [[protitelo|protiteles]] ali [[antigen|antigenov]] v vzorcu. Za določanje protiteles se uporablja indirektna ELISA. Direktna ali sendvič ELISA pa je prirejena za določanje antigenov. Pri obeh načinih ELISE je na zadnje dodano protitelo vezan [[encim]] (od tu izhaja ime metode), ki omogoči spremembo barve substrata in tako detekcijo prisotnosti preiskovanega protitelesa ali antigena. Ker je lahko uporabljamo za detekcijo tako protiteles, kot tudi antigenov v [[vzorec|vzorcu]], je primerna za določanje protiteles na različne [[virus|viruse]] ([[HIV]] test) ali za določanje prisotnosti antigenov v [[serum|serumu]]. Uporablja se jo tudi v živilski industriji, za dokazovanje prisotnosti [[alergen|alergenov]], kot so [[mleko]], [[arašid|arašidi]], [[oreh|orehi]] ali [[jajca]].
 
 
 
==Princip==
 
===Direktna (sendvič) ELISA===
 
 
Osnovni koraki:
# Na trdni nosilec vežemo znano protitelo za antigen, ki ga določamo.
# Dodamo vzorec, ki vsebuje preiskovan antigen.
# Speremo nosilec, da odstranimo nevezane antigene.
# Dodamo protitelesa specifična na vezan antigen, ki so označena z encimom[[encim]]om.
# Speremo ploščo, da odstranimo nevezana protitelesprotitelesa.
# Dodamo substrat, ki ob prisotnosti encima razvije barvo.
# Detektiramo intenzivnost barve.
 
Slika na desni strani vsebuje še dodaten korak. Po vezavi preiskovanega antigena, dodamo detekcijsko protitelo. Šele nato dodamo z encimom označeno protitelo na detekcijsko protitelo. Takšna protitelesa se vežejo na Fc regije drugih protiteles. Na ta način se izognemu zamudnemu postopku konjugacije protiteles z encimom, za vsak posamezen antigen, ki ga želimo določiti.
 
 
Slika na desni strani vsebuje še dodaten korak. Po vezavi preiskovanega antigena, dodamo detekcijsko protitelo. Šele nato dodamo z encimom označeno protitelo na detekcijsko protitelo. Takšna protitelesa se vežejo na Fc -regije drugih protiteles. Na ta način se izognemu zamudnemu postopku konjugacije protiteles z encimom, za vsak posamezen antigen, ki ga želimo določiti.
 
===Indirektna ELISA===
Se uporablja za detekcijo specifičnih protiteles v vzorcu. Osnovni koraki so:
# Na trdni nosilec vežemo znan antigen.
# Dodamo vzorec s preiskovanimi protitelesi, ki so ponavadi raztopljena v serumu druge živalske vrste, da se izognemo vezavi drugih nespecifičnih protiteles.
# Speremo nevezana protitelesa.
# Dodamo protitelesa označena z encimom, ki se vežejo na že vezana protitelesa.
# Speremo nevezana označena protitelesa.
# Dodamo substrat, ki ob prisotnosti encima razvije barvo.
# Detektiramo barvo.
 
 
==ZunanjeZunanji povezavepovezavi==
* [http://www.elispot-analyzers.de/english/elisa-animation.html Animacija ELISA testa]
* [http://www.sumanasinc.com/webcontent/anisamples/molecularbiology/ELISA.html Animirana primerjava direktne in indirektne ELISE]
 
==ReferenceReferenci==
* Engvall E, Perlman P. "Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G", ''Immunochemistry'', 1971 Sep;8(9):871-4 [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=5135623 PMID: 5135623]
* Goldsby, R.A., Kindt, T.J., Osborne, B.A. & Kuby, J. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay. In: Immunology, 5th ed.(2003), pp. 148-150. W. H. Freeman, New York.
15.505

urejanj