ELISA: razlika med redakcijama

dodanih 93 zlogov ,  pred 7 leti
brez povzetka urejanja
m (Bot: Migracija 1 interwikija/-ev, od zdaj gostuje(-jo) na Wikipodatkih, na d:Q332126)
[[Slika:Microtiter plate.JPG|thumb|300px|[[Mikrotitrska plošča]] na kateri se izvaja ELISA.]]
 
'''EncimskoimunskiEncimska test''',imunoadsorpcijska '''encimski imunski testpreiskava''' ali '''ELISA''' ([[angleščina|angleško]]: ''Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay'') je [[biokemija|biokemijska]]imunska metoda, ki se uporablja v [[imunologija|imunologiji]] za detekcijozaznavanje [[protitelo|protiteles]] ali [[antigen]]ov v biološkem vzorcu. Za določanjemerjenje koncentracije protiteles se uporablja indirektnaposredna ELISA. DirektnaNeposredna ali sendvič ELISA pa je prirejena za določanje antigenov. Pri obeh načinih ELISE je na zadnje dodano protitelo vezan [[encim]] (od tu izhaja ime metode), ki omogoči spremembo barve substrata in tako detekcijozaznavanje prisotnosti preiskovanega protitelesa ali antigena. Ker jejo lahko uporabljamo za detekcijo tako protiteles, kot tudi antigenov v [[vzorec|vzorcu]], je primerna za določanjezaznavanje protiteles na različne [[virus]]e ([[HIV]] test) ali za določanje prisotnosti antigenov v [[biološkem vzorcu (serum]]u, plazma, slina,...). Uporablja se jo tudi v živilski industriji, za dokazovanje prisotnosti [[alergen]]ov, kot so [[mleko]], [[arašid]]i, [[oreh]]i ali [[jajca]].
 
== Princip ==
[[Slika:ELISA-sandwich.svg|thumb|300px|'''Direktna (sendvič) ''ELISA'''''. (1) Na površini plošče so vezana protitelesa; (2) dodamo vzorec in preiskovani antigen se veže na pritrjeno protitelo; (3) dodamo detekcijsko protitelo, ki se veže na vezan antigen; (4) dodamo encimsko označeno protitelo, ki se veže na detekcijsko protitelo ; (5) dodamo substrat, ki ob prisotnosti encima spremeni barvo.]]
 
=== DirektnaNeposredna (sendvič) ELISA ===
 
Osnovni koraki:
# Na trdni nosilec (vdolbino mikrotitrske ploščice) vežemo znano protitelo za antigen, ki ga določamo.
# Dodamo vzorec, ki vsebuje preiskovanpreiskovani antigen.
# Speremo nosilecploščico, da odstranimo nevezane antigene.
# Dodamo protitelesa specifična naza vezan antigen, ki so označena (konjugirana) z [[encim]]om.
# Speremo ploščo, da odstranimo nevezana protitelesa.
# Dodamo substrat, ki ob prisotnosti encima razvije barvo.
# DetektiramoIzmerimo intenzivnost barve.
 
Slika na desni strani vsebuje še dodaten korak. Po vezavi preiskovanega antigena, dodamo detekcijsko protitelo. Šele nato dodamo z encimom označeno protitelo na detekcijsko protitelo. Takšna protitelesa se vežejo na Fc-regije drugih protiteles. Na ta način se izognemu zamudnemu postopku konjugacije protiteles z encimom, za vsak posamezen antigen, ki ga želimo določiti.
 
=== IndirektnaPosredna ELISA ===
SeUporablja uporabljase za detekcijomerjenje specifičnih protiteles v biološkem vzorcu. Osnovni koraki so:
# Na trdni nosilec (mikrotitrsko ploščico) vežemo znan antigen.
# Dodamo vzorec s preiskovanimi protitelesi, ki so po navadi raztopljena v serumu druge živalske vrste, da se izognemo vezavi drugih nespecifičnih protiteles.
# Speremo nevezana protitelesa.
# Speremo nevezana označena protitelesa.
# Dodamo substrat, ki ob prisotnosti encima razvije barvo.
# Izmerimo intenzivnost barve.
# Detektiramo barvo.
 
== Zunanje povezave ==
* [http://www.immunospot.eu/elisa-animation.html Animacija ELISA testa]
* [http://www.sumanasinc.com/webcontent/anisamples/molecularbiology/ELISA.html Animirana primerjava direktneposredne in indirektneneposredne ELISE]
 
== Reference ==
8

urejanj